"ФС.2.1.0328. Фармакопейная статья. Этопозид"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

(5R,5aR,8aR,9S)-5-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-9-({4,6-O-[(1R)-этан-1,1-диил]--D-глюкопиранозил}окси)-5,8,8a,9-тетрагидрофуро[3',4':6,7]нафто[2,3-d][1,3]диоксол-6(5aH)-он.

Содержит не менее 98,0% и не более 102,0% этопозида в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

<*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Умеренно растворим в метаноле, мало растворим в спирте 96%, практически нерастворим в воде.

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца этопозида.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика этопозида на хроматограмме раствора стандартного образца этопозида (раздел "Количественное определение").

3. Качественная реакция. В пробирке растворяют 5 мг субстанции в 5 мл уксусной кислоты ледяной и прибавляют 50 мкл железа(III) хлорида раствора 10,5%, перемешивают и осторожно прибавляют 2 мл серной кислоты концентрированной, избегая смешивания двух слоев. Оставляют примерно на 30 мин; на поверхности раздела должно появиться кольцо от розового до красно-коричневого цвета, верхний слой должен быть желтым.

Удельное вращение. От -106 до -114 в пересчете на безводное вещество (0,5% раствор субстанции в смеси метанол - метиленхлорид 1:9, ОФС "Оптическое вращение").

Прозрачность раствора. Раствор 0,6 г субстанции в 20 мл смеси метанол - метиленхлорид 1:9 должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании "Прозрачность раствора", должен выдерживать сравнение с эталоном Y₆ или BY₆ (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Подвижная фаза А (ПФА). Муравьиная кислота безводная - триэтиламин - вода 1:1:998.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Муравьиная кислота безводная - триэтиламин - ацетонитрил 1:1:998.

Растворитель. ПФА - ПФБ 50:50.

Растворы используют свежеприготовленными.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 40 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Растворяют 4 мг фармакопейного стандартного образца этопозида для проверки пригодности хроматографической системы, содержащего примеси B, C, D, E, N и O в 1 мл растворителя.

Примечание

Примесь B: (5R,5aS,8aR,9S)-5-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-9-({4,6-O-[(1R)-этан-1,1-диил]--D-глюкопиранозил}окси)-5,8,8a,9-тетрагидрофуро[3',4':6,7]нафто[2,3-d][1,3]диоксол-6(5aH)-он [100007-56-5].

Примесь C: (5R,5aR,8aR,9S)-5-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-9-({4,6-O-[(1R)-этан-1,1-диил]--D-глюкопиранозил}окси)-5,8,8a,9-тетрагидрофуро[3',4':6,7]нафто[2,3-d][1,3]диоксол-6(5aH)-он [100007-53-2].

Примесь D: (5R,5aR,8aR,9S)-5-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-9-(-D-глюкопиранозилокси)-5,8,8a,9-тетрагидрофуро[3',4':6,7]нафто[2,3-d][1,3]диоксол-6(5aH)-он [23363-35-1].

Примесь E: (5R,5aR,8aR,9S)-9-Гидрокси-5-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-5,8,8a,9-тетрагидрофуро[3',4':6,7]нафто[2,3-d][1,3]диоксол-6(5aH)-он [6559-91-7].

Примесь N: (5R,5aR,8aR,9S)-5-(4-{[(5R,5aR,8aR,9S)-5-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-6-оксо-5,5a,6,8,8a,9-гексагидрофуро[3',4':6,7]нафто[2,3-d][1,3]диоксол-9-ил]окси}-3,5-диметоксифенил)-9-({4,6-O-[(1R)-этан-1,1-диил]--D-глюкопиранозил}окси)-5,8,8a,9-тетрагидрофуро[3',4':6,7]нафто[2,3-d][1,3]диоксол-6(5aH)-он.

Примесь O: (5R,5aR,8aR,9S)-5-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-9-({2,3-ди-O-(дихлорацетил)-4,6-O-[(1R)-этан-1,1-диил]--L-глюкопиранозил}окси)-5,8,8a,9-тетрагидрофуро[3',4':6,7]нафто[2,3-d][1,3]диоксол-6(5H)-он.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Этопозид - 1 (около 5 мин); примесь D - около 0,4; примесь E - около 0,8; примесь C - около 1,1; примесь B - около 1,2; примесь N - около 3,1; примесь O - около 4,2.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу этопозида для проверки пригодности системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

- отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси C и этопозида должно быть не менее 2,0;

- отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси B и примеси C должно быть не менее 3,0.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площадь пика примеси O умножают на 1,7.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика каждой из примесей B, C, D, E, N не должна более чем в 2 раза превышать площадь пика этопозида на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2%);

- площадь пика примеси O не должна превышать 1,5 площади основного пика этопозида на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика этопозида на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать десятикратную площадь пика этопозида на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади основного пика этопозида на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

Вода. Не более 6,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 0,25 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б), в зольном остатке, полученном в испытании "Сульфатная зола", с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,8 ЕЭ на 1 мг этопозида (ОФС "Бактериальные эндотоксины"). Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции в спирте 96% с концентрацией 10 мг/мл.

--------------------------------

<**> Испытания проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора до метки.

Раствор стандартного образца этопозида. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца этопозида, растворяют в растворителе и доводят объем раствора до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца этопозида и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца этопозида относительное стандартное отклонение площади пика этопозида должно быть не более 1,0% (6 введений).

Содержание этопозида C₂₉H₃₂O₁₃ в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика этопозида на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика этопозида на хроматограмме раствора стандартного образца этопозида;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца этопозида, мг;

P - содержание этопозида в фармакопейном стандартном образце этопозида, %;

W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

В герметично укупоренной упаковке, в защищенном от света месте.