"МУК 4.1.4023-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств триадименола в воде методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля"
(утв. Роспотребнадзором 31.05.2024)

1. Разработаны ФБУН "ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (Кузьмин С.В., Синицкая Т.А., Федорова Н.Е., Егорченкова О.Е., Горячева Л.В., Ларькина М.В., Гордиюк А.В.).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой "31" мая 2024 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее - МУК) описывают порядок применения метода газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее - ГХ-МС) для определения массовой концентрации триадименола в воде в диапазоне: 0,001 - 0,010 мг/дм³ - без учета разбавления и 0,001 - 0,500 мг/дм³ - с учетом разбавления в 50 раз.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Триадименол - смесь двух диастереомеров (1RS,2RS)-1-(4-хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)бутан-2-ол (стереомер A), (1RS,2SR)-1-(4-хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)бутан-2-ол (стереомер B) <1>. Класс - триазолы. Брутто-формула C₁₄H₁₈ClN₃O₂. Молекулярная масса 295,8.

--------------------------------

<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства.

Бесцветный кристаллический порошок со слабым характерным запахом. Технический продукт представляет собой смесь двух диастереомеров A и B, в соотношении 7:3. Температура плавления плюс 110 °C. Давление паров при температуре плюс 20 °C: 6,0 x 10^-4 мПа (A), 4,0 x 10^-4 мПа (B). Плотность при температуре плюс 22 °C: 1,237 г/см³ (A), 1,299 г/см³ (B). Коэффициент распределения н-октанол-вода K_owlogP при температуре плюс 25 °C: 3,08 (A), 3,28 (B). Растворимость в воде при температуре плюс 20 °C: 62 мг/дм³ (A), 33 г/дм³ (B). Растворимость в органических растворителях при температуре плюс 20 °C: дихлорметан - 200 - 500 г/дм³; изопропанол - 50 - 100 г/дм³, гексан - 0,1 - в 1,0 г/дм³; толуол - 20 - 50 г/дм³. Вещество устойчиво к гидролизу при pH 4 - 9 и фотолизу. Гидролитическая стабильность DT₅₀ > 1 года.

2.3. Краткая токсикологическая характеристика.

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) - 700 мг/кг (крысы); 1300 мг/кг (мыши); острая дермальная токсичность (LD₅₀) для кроликов более 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс более 0,9 мг/дм³ воздуха (4 ч).

2.4. Область применения.

Триадименол - системный фунгицид широкого спектра действия. Эффективен против возбудителей мучнистой росы, различных видов ржавчины, септориоза, твердой и пыльной головни, тифулеза, гельминтоспориоза, листовых пятнистостей на зерновых злаках, овощных и плодовых культурах, виноградниках. Используется как для обработки вегетирующих растений, так и для протравливания семян.

3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК погрешность (и ее составляющие) <2> результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

--------------------------------

<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 N 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).

4.1. Измерения концентраций триадименола выполняют методом ГХ-МС.

4.2. Концентрирование триадименола из проб воды проводят на патронах (картриджах) для твердофазной экстракции (далее - ТФЭ) с гидрофильно-липофильным сорбентом на основе сополимера N-винилпирролидона и дивинилбензола.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы воды - 0,04 нг. Средняя полнота извлечения из воды - 97%.

4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 Мпа (150 кгс/см²) осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>.

--------------------------------

<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 N 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом ГХ-МС, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 - 30 °C и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на ГХ-МС проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка ацетона (при необходимости), подготовка патронов (картриджей) для ТФЭ к работе, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики.

8.2. Очистка ацетона.

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ растворителя около 10 г перманганата калия и 30 г карбоната калия) или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят при комнатной температуре не более 1 месяца.

8.3. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения.

8.3.1. Исходный раствор триадименола для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г триадименола, растворяют в 50 - 60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 3 месяцев.

8.3.2. Раствор N 1 триадименола для градуировки и внесения (концентрация 2,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 2,0 см³ исходного раствора с концентрацией триадименола 100 мкг/см³ (п. 8.3.1), разбавляют ацетоном до метки.

Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более месяца.

Раствор N 1 триадименола для градуировки и внесения (концентрация 2,0 мкг/см³) используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.3.3. Растворы N 2 - 6 для градуировки готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

Рабочие растворы N 2 - 6 триадименола для градуировки (концентрации 0,02 - 0,2 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 1,0; 2,5; 4,0; 5,0 и 10,0 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией 2,0 мкг/см³ (п. 8.3.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией триадименола 0,02; 0,05; 0,08; 0,1 и 0,2 мкг/см³, соответственно.

Рабочие растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 10 дней.

8.4. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую линейную зависимость суммы площадей пиков двух диастереомеров от концентрации триадименола в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 2 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования (см. п. 10.2). Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков триадименола, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание триадименола в которых должно входить в диапазон концентраций от 0,02 до 0,2 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1), (2):

где: A - величина расхождения, %;

X - концентрация триадименола в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора триадименола, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.

8.6. Подготовка к работе патронов (картриджей) для твердофазной экстракции.

Патрон (картридж) устанавливают плотно в необходимые позиции манифолда. Сверху в патрон устанавливают стеклянную пипетку вместимостью 5 см³, используемую в качестве емкости для элюента.

Концентрирующий патрон промывают последовательно 3 см³ метанола и 3 см³ бидистиллированной (деионизированной) воды, процедуру проводят с использованием вакуума. Скорость элюирования - 1 - 2 см³/мин. Патроны (картриджи) готовят непосредственно перед использованием <4>.

--------------------------------

<4> Примечание: в отсутствие специального устройства для работы с патронами (картриджами), жидкость продавливают через патрон (картридж) с помощью шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 2 - 3 капли/сек.

8.7. Проверка поведения триадименола на концентрирующем патроне (картридже).

Раствор N 1 триадименола для внесения с концентрацией 2,0 мкг/см³ (п. 8.3.2) объемом 0,1 см³ вносят в 10 см³ бидистиллированной (деионизированной) воды, тщательно перемешивают и наносят на подготовленный концентрирующий патрон, приготовленный в соответствии с п. 8.6, патрон промывают 2 см³ бидистиллированной (деионизированной) воды, элюат отбрасывают.

Триадименол элюируют с патрона 6 см³ метанола, отбирая фракционно (по 2 см³) элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 см³ ацетона, анализируют на содержание триадименола в соответствии с п. 10.2.

Фракции, содержащие триадименол, объединяют и вновь анализируют. Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюента <5>.

--------------------------------

<5> Примечание: проверка хроматографического поведения триадименола проводится обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <6>.

--------------------------------

<6> ГОСТ Р 59024-2020 "Вода. Общие требования к отбору проб", введенный приказом Росстандарта от 10.09.2020 N 640-ст; ГОСТ Р 70282-2022 "Общие требования к отбору проб льда и атмосферных осадков", введенный приказом Росстандарта от 05.10.2022 N 1075-ст.

9.2. Пробы воды отбирают и хранят в стеклянных бутылях при температуре плюс 2 - 6 °C не более 5 суток. При отборе допускается консервация азотной кислотой до pH 3.

10.1. Образец воды, объемом 40 см³, фильтруют через неплотный фильтр и пропускают через патрон (картридж), подготовленный в соответствии с п. 8.6, со скоростью прохождения пробы 1 - 2 см³/мин. После нанесения пробы патрон промывают 2 см³ бидистиллированной (деионизированной) воды. Триадименол элюируют с патрона 2 см³ метанола в круглодонную колбу вместимостью 50 см³. Полученный элюат упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше плюс 35 °C досуха.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетона, тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.2.

10.2. Условия хроматографирования.

Газовый хроматограф, оснащенный масс-спектрометрическим детектором, предназначенный для работы с капиллярной колонкой.

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент 5% фенил- и 95% диметилполисилоксана, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура детектора: источник - плюс 200 °C, переходной линии - плюс 250 °C.

Температура испарителя: плюс 270 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - плюс 160 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 10 °C/мин до температуры плюс 230 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 20 °C/мин до температуры плюс 270 °C, выдержка 2 мин.

Газ-носитель (гелий):

- поток в колонке 1,0 см³/мин;

- давление 99,821 кПа;

- средняя линейная скорость 37,899 см/сек;

- деление потока - 1:1;

- хроматографируемый объем: 2 мм³.

Режим сканирования - мониторинг выбранных ионов (SIM).

Характеристические ионы с m/z (отношение: масса/заряд): 168 (количественный), 112, 128.

Линейный диапазон детектирования: 0,04 - 0,4 нг.

Ориентировочное время удерживания триадименола: 9,747 мин (пик максимальной интенсивности).

Образцы, дающие пики больше чем градуировочный раствор триадименола с концентрацией 0,2 мкг/см³, разбавляют ацетоном, не более чем в 50 раз.

11.1. Содержание триадименола (X₁, мг/дм³) рассчитывают по формуле (3) <7>:

--------------------------------

<7> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

где: A - концентрация триадименола, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной суммы площадей хроматографических пиков двух диастереомеров, мкг/см³;

V₁ - объем элюата, подготовленного для хроматографирования, см³;

V₂ - объем пробы воды, см³;

Кр - коэффициент разбавления (если образец подвергался разбавлению)

11.2. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости и удовлетворяет условие (4):

где: X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/дм³;

r - значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом .

При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12.1. Результат анализа представляют в виде формулы (5):

где: - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дм³;

- граница абсолютной погрешности, мг/дм³, рассчитанная по формуле (6):

где: - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание триадименола в пробе воды - менее 0,001 мг/дм³" <8>.

--------------------------------

<8> Примечание: 0,001 мг/дм³ - предел обнаружения триадименола в воде.

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <9>.

--------------------------------

<9> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст.

Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Постановление Правительства Российской Федерации от 16.11.2020 N 1847 "Об утверждении перечня измерений, относящихся к сфере государственного регулирования обеспечения единства измерений".

3. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.

4. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

5. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".

6. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений".

7. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".

8. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений".

9. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

10. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

11. ГОСТ 1770-74 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

12. ГОСТ 29227-91 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

13. ГОСТ OIML R 111-1-2009 "Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

14. ГОСТ 2603-79 "Ацетон. Технические условия".

15. ГОСТ 20490-75 "Калий марганцовокислый. Технические условия".

16. ГОСТ 4221-76 "Калий углекислый. Технические условия".

17. ГОСТ 6995-77 "Метанол-яд. Технические условия".

18. ГОСТ Р 52501-2005 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

19. ГОСТ 4461-77 "Кислота азотная. Технические условия".

20. ГОСТ 12026-76 "Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия".

21. ГОСТ 25336-82 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

22. ГОСТ 26678-85 "Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия".

23. ГОСТ ISO 7886-1-2011 "Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

24. ГОСТ 12.1.007-76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

25. ГОСТ 12.1.019-2017 "Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

26. ГОСТ 12.1.004-91 "Пожарная безопасность. Общие требования".

27. ГОСТ 12.4.009-83 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

28. ГОСТ Р 59024-2020 "Вода. Общие требования к отбору проб".

29. ГОСТ Р 70282-2022 "Общие требования к отбору проб льда и атмосферных осадков".