"МУК 4.1.3808-22. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций глифосата в воздухе рабочей зоны и в атмосферном воздухе городских и сельских поселений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 06.12.2022)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, А.А. Ивченкова, Н.А. Степанова).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 6 декабря 2022 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) с флуориметрическим детектированием для измерения массовой концентрации глифосата в воздухе рабочей зоны в диапазоне: (0,5 - 5,0) мг/м³ - без учета разбавления и при разбавлении в 50 раз (0,5 - 250) мг/м³; в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне: (0,025 - 0,25) мг/м³ - без учета разбавления и при разбавлении в 50 раз (0,025 - 12,5) мг/м³.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области качества и безопасности атмосферного воздуха городских и сельских поселений и воздуха рабочей зоны.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Глифосат - N-(фосфонометил)-глицин <1>. Брутто-формула C₃H₈NO₅P. Молекулярная масса 169,1.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства. Белые кристаллы без запаха. Температура плавления 189,5 °C. Давление паров 1,31·10^-2 мПа (при плюс 25 °C). Растворимость в воде при плюс 25 °C - 12 г/дм³. Плотность 1,41 (плюс 23,5 °C). Коэффициент распределения октанол/вода < -3,2 (pH 5 - 9). Растворимость в органических растворителях в г/дм³ плюс (20 - 25) °C: ацетон - 0,078; этилацетат - 0,012; метанол - 0,231; 1,2-дихлорметан - 0,233; изопропанол - 0,02; толуол - 0,036.

Глифосат и все его соли нелетучи, не подвержены фотохимическому разложению в буферной воде и стабильны на воздухе.

2.3. Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс и мышей составляет соответственно 5600 и 11300 мг/кг. Острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс - 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс - > 4,98 мг/л воздуха (4 ч). LD₅₀ для рыб > 1000 мг/л, LC₅₀ для дафний - 780 мг/л, LC₅₀ для водорослей - 1,2 - 42 мг/л (7 дней).

2.4. Гербицид неизбирательного системного действия для уничтожения однолетних и многолетних сорняков и нежелательной древесно-кустарниковой растительности.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Примечание. Диапазон определяемых концентраций, указанный в табл. 3.1, приведен с учетом разбавления экстракта образца в 50 раз.

4.1. Измерения концентраций глифосата выполняют методом ВЭЖХ с флуориметрическим детектором.

4.2. Концентрирование вещества из воздуха осуществляют на бумажные фильтры средней фильтрации, экстракцию с фильтров проводят водой.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 2 нг. Средняя полнота извлечения из проб воздуха рабочей зоны и атмосферного воздуха соответственно 85,1% и 86,1%.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать технику безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 - 30) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление растворов, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

8.2. Приготовление раствора ацетата аммония с молярной концентрацией 0,005 моль/дм³ (0,005 М), содержащего 0,2% уксусной кислоты.

В мерную колбу вместимостью 500 см³ помещают (0,19 +/- 0,01) г ацетата аммония. Растворяют в 100 - 200 см³ воды. Пипеткой добавляют 1 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят объем до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в герметично закрытой таре при комнатной температуре не более 10 дней.

8.3. Приготовление раствора тетрабората натрия с молярной концентрацией 0,05 моль/дм³ (0,05 М раствор). В мерную колбу на 100 см³ вносят 1,906 г тетрабората натрия, растворяют в 50 см³ воды, доводят до метки водой, тщательно перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре в герметично закрытой посуде не более 14 дней.

8.4. Приготовление раствора 9-флуоренилметилхлорформиата (далее - FMOC) концентрацией 0,1 мг/см³. В мерную колбу на 100 см³ вносят 0,01 г 9-флуоренилметилхлорформиата, растворяют в 50 см³ ацетонитрила, доводят до метки тщательно перемешивают. Раствор хранят в холодильной камере в герметично закрытой посуде при температуре плюс (2 - 6) °C не более 14 дней.

8.5. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения.

8.5.1. Исходный раствор глифосата (концентрация 1000 мкг/см³). В полипропиленовую мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г глифосата, растворяют в 5 - 6 см³ воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильной камере в герметично закрытой посуде при температуре плюс (2 - 6) °C не более 1 месяца.

8.5.2. Раствор N 1 глифосата для внесения (концентрация 100 мкг/см³). В полипропиленовую мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают дозатором переменного объема 100 - 1000 мм³ с пластиковым наконечником 1,0 см³ исходного раствора с концентрацией глифосата 1000 мкг/см³ (п. 8.5.1), разбавляют водой до метки.

Раствор хранят в холодильной камере в герметично закрытой посуде при температуре плюс (2 - 6) °C не более 1 месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.5.3. Раствор N 2 глифосата для внесения (концентрация 10,0 мкг/см³). В полипропиленовую мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают дозатором переменного объема 100 - 1000 мм³ с пластиковым наконечником 1,0 см³ раствора N 1 с концентрацией глифосата 100 мкг/см³ (п. 8.5.2), разбавляют водой до метки.

Раствор хранят в холодильной камере в герметично закрытой посуде при температуре плюс (2 - 6) °C не более 2 недель.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.5.4. Рабочие растворы N 3 - 7 глифосата для градуировки (концентрации 0,1 - 1,0 мкг/см³) готовят объемным методом путем разбавления раствора N 2 (п. 8.5.3).

В 5 мерных полипропиленовых колб вместимостью 10 см³ помещают дозатором с пластиковым наконечником по 0,1; 0,5; 0,8; 1,0 и 1,2 см³ градуировочного раствора N 2 с концентрацией 10,0 мкг/см³ (п. 8.5.3), доводят до метки водой, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 7 с концентрацией 0,1; 0,5; 0,8; 1,0 и 1,2 мкг/см³ соответственно.

Рабочие растворы (N 3 - 7) хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более трех дней.

8.5.5. Рабочие растворы N 3а - 7а производных глифосата для градуировки (соответствуют концентрации глифосата 0,1 - 1,2 мкг/см³). Операцию дериватизации проводят в полипропиленовых пробирках на 15 см³. В 5 пробирок помещают по 0,2 см³ каждого из пяти рабочих растворов глифосата N 3 - 7 (п. 8.5.4), прибавляют по 0,8 см³ воды, а затем по 0,5 см³ 0,05 М раствора тетрабората натрия, приготовленного по п. 8.3 и по 0,5 см³ 0,1 мг/см³ раствора FMOC, приготовленного по п. 8.4, тщательно перемешивают и выдерживают 15 минут при температуре 50 °C в сушильном шкафу. После охлаждения в течение 10 минут при комнатной температуре проводят очистку толуолом. В каждую пробирку вносят по 4 см³ толуола, закрывают крышкой и встряхивают вручную. При недостаточно четком разделении фаз пробирки центрифугируют в течение 3 минут при 3000 об/мин, после чего верхний слой толуола удаляют. Операцию очистки с помощью толуола повторяют еще раз. Для анализа берут нижний слой. Получают рабочие растворы производных глифосата N 3а - 7а с концентрациями 0,1, 0,5, 0,8, 1,0 и 1,2 мкг/см³ соответственно.

Дериватизированные градуировочные растворы готовят в день их использования.

8.6. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую линейную зависимость площади пика от концентрации производной глифосата в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки.

В хроматограф вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пика глифосата, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание глифосата в которых должно входить в диапазон концентраций от 0,1 до 1,2 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где A - величина расхождения, %;

X - концентрация глифосата в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора глифосата, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 10% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.

8.7. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха. Диаметр бумажного фильтра высокой плотности "синяя лента" должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя. Площадь поглощения фильтра в фильтродержателе составляет 10 см².

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетоном порциями 25 - 30 см³, сушат с помощью разрежения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами <2>.

--------------------------------

<2> Глава 2 приложения 9 руководства Р 2.2.2006-05 "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", утвержденного Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29.07.2005; ГОСТ 12.1.005 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны", утвержденный постановлением Госстандарта СССР от 29.09.1988 N 3388; ГОСТ 17.2.3.01 "Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов", утвержденный постановлением Госстандарта СССР от 10.11.1986 N 3395.

9.1.1. Воздух рабочей зоны.

Воздух с объемным расходом 2,0 дм³/мин аспирируют через бумажный фильтр диаметром 55 мм. Для определения вещества на уровне предела обнаружения (0,5 мг/м³) необходимо отобрать 4 дм³ воздуха.

В процессе отбора фиксируется атмосферное давление и температура воздуха на входе в аспиратор.

Срок хранения отобранных проб в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C 10 дней.

9.1.2. Атмосферный воздух.

Воздух с объемным расходом 5,0 дм³/мин аспирируют через бумажный фильтр диаметром 70 мм. Для определения вещества на уровне предела обнаружения (0,025 мг/м³) необходимо отобрать 80 дм³ воздуха.

В процессе отбора фиксируется атмосферное давление и температура воздуха на входе в аспиратор.

Срок хранения отобранных проб в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C 10 дней.

10.1. Измельченные ножницами бумажные фильтры помещают в полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³. Экстрагируют глифосат 10 см³ воды, отмеряя мерным цилиндром на 10 см³. Пробирки перемешивают интенсивно на вихревом смесителе в течение 5 минут. Экстракт сливают в чистую полипропиленовую пробирку. Процедуру повторяют еще раз. Экстракты объединяют.

Проводят операцию дериватизации в полипропиленовых пробирках на 15 см³. В каждую пробирку помещают по 0,2 см³ пробы, прибавляют по 0,8 см³ воды, а затем по 0,5 см³ 0,05 М раствора тетрабората натрия, приготовленного по п. 8.3 и по 0,5 см³ 0,1 мг/см³ раствора FMOC, приготовленного по п. 8.4, тщательно перемешивают и выдерживают 15 минут при температуре плюс 50 °C в сушильном шкафу. После охлаждения в течение 10 минут при комнатной температуре, проводят очистку толуолом. В каждую пробирку вносят по 4 см³ толуола, закрывают крышкой и тщательно перемешивают. При недостаточно четком разделении фаз пробирки центрифугируют в течение 3 минут при 3000 об/мин, после чего верхний слой толуола удаляют. Операцию очистки с помощью толуола повторяют еще раз. Для анализа берут нижний слой. Помещают его в хроматографическую виалу и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

Пробу вводят не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию глифосата в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией глифосата 1,0 мкг/см³, разбавляют водой (не более, чем в 50 раз).

10.3. Условия хроматографирования:

- жидкостный хроматограф с флуориметрическим детектором;

- колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая сорбент C18, зернением 5 мкм;

- температура колонки плюс 30 °C;

- подвижная фаза: ацетонитрил - 0,005 М ацетат аммония с содержанием уксусной кислоты 0,2%-й (25:75, по объему);

- скорость потока элюента 0,8 см³/мин;

- длина волны возбуждения 270 нм;

- длина волны эмиссии 313 нм;

- объем вводимой пробы 20 мм³;

- ориентировочное время выхода производного соединения глифосата 5,5 мин;

- линейный диапазон детектирования 2,0 - 24 нг.

11.1. Концентрацию вещества в пробе воздуха (X), мг/м³, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, (20 см³);

К_р - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

V_t - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0 °C) для атмосферного воздуха или к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура плюс 25 °C) для воздуха рабочей зоны, дм³:

где T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °C,

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.,

u - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин,

t - длительность отбора пробы, мин,

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны и 0,359 для атмосферного воздуха.

Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, мг/м³;

- граница абсолютной погрешности, мг/м³:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, табл. 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание глифосата в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,5 мг/м³, в пробе атмосферного воздуха - менее 0,025 мг/м³" <3>.

--------------------------------

<3> 0,5 мг/м³ - предел обнаружения глифосата при отборе 4 дм³ воздуха рабочей зоны;

0,025 мг/м³ - предел обнаружения глифосата при отборе 80 дм³ атмосферного воздуха.

13.1 Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6).

Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.

13.2. Показатели повторяемости и воспроизводимости, пределы повторяемости и воспроизводимости при P = 0,95 приведены в табл. 13.1.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. "Перечень измерений, относящихся к сфере государственного регулирования обеспечения единства измерений", утвержден постановлением Правительства РФ от 16 ноября 2020 г. N 1847.

3. СанПиН 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания".

4. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Государственный стандарт Российской Федерации. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

5. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

6. ГОСТ 29227 "Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

7. ГОСТ 1770 "Межгосударственный стандарт. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

8. ГОСТ OIML R 111-1 "Межгосударственный стандарт. Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

9. ГОСТ Р 51945 "Государственный стандарт Российской Федерации. Аспираторы. Общие технические условия".

10. ГОСТ 28311 "Государственный стандарт Союза ССР. Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний".

11. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

12. ГОСТ 12026 "Межгосударственный стандарт. Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия".

13. ГОСТ 21241 "Государственный стандарт Союза ССР. Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний".

14. ГОСТ 26678 "Государственный стандарт Союза ССР. Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия (с Изменением N 1)".

15. ГОСТ 3117 "Государственный стандарт Союза ССР. Реактивы. Аммоний уксуснокислый. Технические условия".

16. ГОСТ 4199 "Государственный стандарт Союза ССР. Реактивы. Натрий тетраборнокислый 10-водный. Технические условия".

17. ГОСТ 5789 "Государственный стандарт Союза ССР. Реактивы. Толуол. Технические условия".

18. ГОСТ 61 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия".

19. ГОСТ 12.1.007 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

20. ГОСТ 12.1.019 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

21. ГОСТ 12.1.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

22. ГОСТ 12.4.009 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

23. ГОСТ 17.2.3.01 "Межгосударственный стандарт. Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов", утвержденный постановлением Госстандарта СССР от 10.11.1986 N 3395".