"МУК 4.1.3897-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций флупирадифурона в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе городских и сельских поселений и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 28.06.2023)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (Ракитский В.Н., Федорова Н.Е., Бондарева Л.Г.).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 28 июня 2023 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для определения в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе городских и сельских поселений и смывах с кожных покровов операторов массовой концентрации флупирадифурона в диапазонах 0,01 - 0,20 мг/м³, 0,0025 - 0,0500 мг/м³ и 0,1 - 2,0 мкг/смыв соответственно.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Флупирадифурон. 4-[[(6-хлоропиридин-3-ил)метил]2,2-ифтороэтил)амино]фуран-2(5Н)-он <1>.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

Брутто-формула - C₁₂H₁₁ClF₂N₂O₂. Молярная масса - 288,7.

2.2. Физические и химические свойства:

- бесцветный порошок;

- температура плавления 69 °C, разлагается при температуре 270 °C;

- давление паров: 9,1·10^-4 мПа (при 20 °C);

- коэффициент распределение н-октанол - вода K_owlogP = 0,08 (20 °C);

- растворимость в воде (20 °C, г/дм³): pH 4 - 3,2; pH 7 - 3,2; pH 9 - 3;

- растворимость в органических растворителях при 20 °C (г/дм³): > 250 - метанол, ацетон, этилацетат, диметил сульфоксид, 3,7 - толуол, 0,0005 - н-гептан.

2.3. Краткая токсикологическая характеристика: острая пероральная токсичность - LD₅₀ составляет < 2000 м/кг, острая дермальная токсичность - LD₅₀ составляет < 2000 мг/кг.

2.4. Флупирадифурон - инсектицид, химического класса производных фуранона.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Диапазон определяемых концентраций, указанный в таблице 3.1, приведен с учетом разбавления образца в 50 раз.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в таблице 3.2.

4.1. Измерения концентраций флупирадифурона выполняют методом ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектором.

4.2. Концентрирование вещества из воздуха осуществляют: бумажные фильтры высокой плотности, экстракцию с фильтров проводят ацетоном. Смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг. Средняя полнота извлечения: с фильтров - 92,6%, с поверхности кожи - 94,0%.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Очистка растворителей.

8.1.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия). Хранят в емкости из темного стекла.

8.1.2. Ацетон. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

8.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ. В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 300 см³ ацетонитрила, 700 см³ дистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Подвижную фазу хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.3. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ. Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 8.2) при скорости подачи растворителя 1,0 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

8.4. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

8.4.1. Исходный раствор флупирадифурона для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,0100 +/- 0,0005 г флупирадифурона, растворяют в 50 - 60 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C, в течение трех месяцев.

8.4.2. Рабочий раствор N 1 флупирадифурона для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного градуировочного раствора с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.4.1), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочий растворы N 1 с концентрацией флупирадифурона 10 мкг/см³.

Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C в течение трех месяцев.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.4.3. Рабочие растворы N 2 - 6 флупирадифурона для градуировки (концентрация 0,1 - 1,0 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10 см³ рабочего раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 8.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрациями флупирадифурона 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 1,0 мкг/см³.

Растворы хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 8 суток.

8.5. Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации флупирадифурона в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования, указанных ниже. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пиков флупирадифурона, на основании которых строят градуировочную зависимость.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание флупирадифурона в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где X - концентрация флупирадифурона в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора флупирадифурона, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).

8.6. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха. Диаметр фильтра высокой плотности должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетонитрилом порциями 25 - 30 см³, сушат с помощью разрежения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

8.7. Подготовка салфеток для проведения смыва.

8.7.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5% (5% раствор).

Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в деионизированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

8.7.2. Подготовка салфеток для проведения смыва.

Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 x 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-ным раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

9.1. Воздушная среда. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <2>.

--------------------------------

<2> ГОСТ 17.2.3.01 "Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных мест", введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 10.11.1986 N 3395, ГОСТ 12.1.005 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны", утвержден и введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 29.09.1988 N 3388, пункт 2 приложения 9 Руководства Р 2.2.2006 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда", утверждено Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29.07.2005, ГОСТ Р 59670 "Воздух рабочей зоны. Общие методические требования к методикам определения содержания химических веществ", утвержден и введен в действие Приказом Росстандарта от 03.09.2021 N 913-ст.

Воздух с объемным расходом 5 дм³/мин аспирируют через бумажные фильтры высокой плотности (воздух рабочей зоны и атмосферный воздух). Для определения вещества на уровне нижнего предела обнаружения (0,01 мг/м³) необходимо отобрать 10 дм³ воздуха (воздух рабочей зоны), для атмосферного воздуха необходимо отобрать 40 дм³ воздуха для контроля вещества на уровне предела обнаружения (0,0025 мг/м³). Срок хранения экспонированных проб воздуха, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике (при плюс 2 - 6 °C) не более 8 суток.

Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре не выше минус 18 °C.

9.2. Смывы с кожных покровов.

Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими средствами индивидуальной защиты участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 см²). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 см³ в стеклянную емкость с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения экспонированных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в холодильнике (при плюс 2 - 6 °C) не более 8 дней.

Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре не выше минус 18 °C.

10.1. Воздушная среда.

Экспонированный бумажный фильтр помещают в химический стакан вместимостью 100 см³, заливают 15 см³ ацетона, помещают на ультразвуковую баню на 15 минут. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 15 см³, выдерживая на ультразвуковой бане по 10 минут.

Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы, фильтруют через мембранный фильтр и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

Пробу вводят в колонку хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию флупирадифурона в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (п. 8.2) (не более чем в 50 раз).

10.2. Смывы с кожных покровов.

Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 см³, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 8.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика флупирадифурона и с помощью градуировочного графика определяют концентрацию вещества в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0, мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (п. 8.2) (не более чем в 50 раз).

10.3. Условия хроматографирования.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

- жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором и термостатом колонки;

- хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми алкильными группами (C-18 или C-8) для удерживания гидрофильных соединений, зернением 5 мкм;

- рабочая длина волны: 260 нм;

- температура колонки: 25 °C;

- подвижная фаза: ацетонитрил - бидистиллированная вода (30:70, по объему);

- скорость потока элюента: 1,0 см³/мин;

- объем вводимой пробы: 20 мм³;

- линейный диапазон детектирования: 1 - 20 нг.

11.1. Воздушная среда.

Концентрацию вещества в пробе воздуха (X), мг/м³, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация флупирадифурона в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

Кр - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

V_t - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура: плюс 20 °C - воздух рабочей зоны и 0 °C - атмосферный воздух), дм³.

где T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), град. C;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

t - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны и 0,357 для атмосферного воздуха.

11.2. Смывы с кожных покровов.

Концентрацию вещества в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

Кр - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³.

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, мг/м³ (мкг/смыв);

- граница абсолютной погрешности, мг/м³ (мкг/смыв);

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, таблица 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

--------------------------------

<3> 0,01 мг/м³; 0,0025 мг/м³; 0,1 мкг/смыв - пределы обнаружения при отборе 10 дм³ воздуха рабочей зоны; при отборе 40 дм³ атмосферного воздуха; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 см²) соответственно.

13.1. Организация контроля качества результатов определения осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6).

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике, после отбора проб экстракт с фильтра или трубки делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - X. Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (величина добавки C_д должна соответствовать 50 - 150% от содержания компонента в пробе, общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой - X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы (X) и рабочей пробы с добавкой (X') получают в условиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.).

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

где - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой), мг/м³, мкг/смыв;

- граница абсолютной погрешности, мг/м³, мкг/смыв.

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Контроль проводят путем сравнения результата контрольной процедуры К_к с нормативом контроля К.

Результат контрольной процедуры К_к рассчитывают по формуле:

где , , C_д - среднее значение массовой концентрации анализируемого компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно (мг/м³, мкг/смыв).

Норматив оперативного контроля точности К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контрольной процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контрольной процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

где 

где X₁, X₂ - результаты измерений в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/м³, мкг/смыв;

R - предел воспроизводимости (таблица 3.1), мг/м³, мкг/смыв.

Если выполняется условие (2), то воспроизводимость измерений считается удовлетворительной.

При превышении норматива контроля вопроизводимости эксперимент повторяют, при повторном превышении указанного норматива выясняют причины и по возможности их устраняют.

1. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия".

2. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений. Гири классов точности E (индекса 1), E (индекса 2), F (индекса 1), F (индекса 2), M (индекса 1), M (индекса 1-2), M (индекса 2), M (индекса 2-3) и M (индекса 3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

3. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

4. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

5. ГОСТ 2603 "Реактивы. Ацетон. Технические условия".

6. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

7. ГОСТ 4221 "Реактивы. Калий углекислый. Технические условия".

8. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

9. ГОСТ 83 "Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия".

10. ГОСТ 5962 "Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия".

11. ГОСТ 18300 "Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия".

12. ГОСТ 9737 "Посуда лабораторная стеклянная. Шлифы сферические взаимозаменяемые".

13. ГОСТ 427 "Линейки измерительные металлические. Технические условия".

14. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

15. ГОСТ 21241 "Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний".

16. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

17. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

18. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

19. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

20. ГОСТ 17.2.4.02 "Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ".

21. ГОСТ 17.2.3.01 "Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных мест".

22. ГОСТ 12.1.005 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

23. Руководство Р 2.2.2006 "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

24. ГОСТ Р 58670 "Воздух рабочей зоны. Общие методические требования к методикам определения содержания химических веществ.

25. ГОСТ Р ИСО 5725 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

26. ГОСТ 29298-2005 "Ткани хлопчатобумажные и смешанные бытовые. Общие технические условия".