"Временные методические указания по определению действующего вещества препарата пликтран и его метаболитов (окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты) в биосубстратах хроматографическим методом"
(утв. Минздравом СССР 27.04.1984 N 3003-84)

Гидроокись трициклогексилолова, структурная формула:

Молекулярная масса: 385,156.

Синонимы и торговые названия: пликтран, цигексатин, тенкайд.

Химически чистое д.в. препарата пликтран - белое кристаллическое соединение с точкой плавления 245 °C. Точка плавления технического продукта (95 - 96% чистоты) - 196 - 198 °C.

Пликтран растворим в большинстве органических растворителей (хлороформ, гексан, метанол, этилацетат и др.). Растворимость в воде ограничена и составляет менее 1 мг/л.

Практически не летуч. Агрегативное состояние в рабочей зоне - гидрозоль.

Пликтран стабилен до 52 °C. Водная суспензия пликтрана стабильна в пределах pH от слабокислотной до щелочной.

Препаративная форма пликтрана стабильна в течение 2-х лет при хранении в нормальных условиях. При взаимодействии с сильными кислотами образуется соль.

Действующее вещество препарата пликтран - гидроокись трициклогексилолова в организме теплокровных образует два метаболита: окись дициклогексилолова и циклогексилоловянную кислоту.

Препарат пликтран предлагается как высокоэффективный акарицид для наземного опрыскивания плодово-ягодных, цитрусовых, овощных, бахчевых культур и хлопчатника против растительных клещей, включая популяции, устойчивые к органофосфорным или другим акарицидам.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении пликтрана и его двух метаболитов из анализируемого биосубстрата органическими растворителями, хроматографировании смеси веществ в тонком слое пластинок "Силуфол" и проявлении хроматограмм спиртовым раствором гематоксилина (альтернативно - кверцетином или пирокатехоловым фиолетовым).

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице.

Примечание. I - трициклогексилоловогидроксид, II - дициклогексилоловооксид, III - циклогексилоловянная кислота.

2.1.3. Избирательность метода

Определению не мешают препараты акрекс, кельтан, антио, рагор, применяемые, как и пликтран, против растительноядных клещей.

н-Гексан хч, ТУ 6-09-3375-78.

Уксусная кислота хч, ГОСТ 61-75.

Этиловый спирт хч, ТУ 6-09-1710-77.

Лимонная кислота хч, ГОСТ 908-79, 0,5-процентный водный раствор.

Гематоксилин хч, имп., 0,1-процентный этанольный раствор.

Кверцетин хч (ЧССР), 0,1-процентный этанольный раствор.

Пирокатехоловый фиолетовый индикатор чда, ТУ 6-09-07-1087-78, насыщенный раствор в этиловом спирте.

Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76.

Активированный уголь марки "БАУ", ТУ 6-09-3247-73.

Соляная кислота чда, ГОСТ 3118-77, водный раствор (1:9).

Силикагель КСК, ТУ 6-09-2525-72 (0,28 - 0,45 мм и 0,10 - 0,14 мм).

Крахмал, ГОСТ 10163-62.

Пластинки хроматографические "Силуфол" - UV254 (ЧССР).

Фильтры обеззоленные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77.

Пластинки стеклянные, 9 x 12 см.

Стандартные растворы гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты с содержанием 100 мкг в 1 мл смеси гексан - уксусная кислота (20:3), готовят из хч веществ.

Весы аналитические с погрешностью не более 0,001 г типа ВЛДП-100 г.

Весы технические с погрешностью не более 0,5 г, ГОСТ 19491-74.

Колбы конические, ГОСТ 10394-72, на 100, 250 мл.

Колбы круглодонные со шлифом, ГОСТ 10394-72, на 100 мл.

Ротационный испаритель, ТУ 25-11-917-74, тип ИР-1М.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 25, 100, 250 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1, 5, 25 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 25, 100 мл.

Стаканы химические, ГОСТ 10394-74.

Воронки лабораторные, ГОСТ 8613-75.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 1065-66.

Камера для опрыскивания.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-65.

Делительные воронки, ГОСТ 8613-75, на 100, 250 мл.

Осветитель ультрафиолетовый, ТУ 25-05-2098-76.

Хроматографические колонки стеклянные (2 x 20 см).

Анализатор световой вибрационный 236-Б-Гр.

Водяные бани, ТУ 46-22-587-75.

2.4.1. Приготовление растворов

Стандартные растворы гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова и циклогексилоловянной кислоты (100 мкг/мл). I. 25 мг хч вещества помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и доводят до метки. II. Из I раствора 10 мл отбирают в мерную колбу емкостью 25 мл и доводят смесью гексан - уксусная кислота до метки. Стандартные растворы хранят до 30 дней.

0,1-процентный раствор гематоксилина в 96% этаноле. 0,1 г гематоксилина помещают в 100 мл колбу и добавляют 96% этанол до метки. На каждые 100 мл раствора добавляют 1 - 2 капли конц. соляной кислоты. Реактив хранят в темной склянке до 60 дней.

0,1-процентный раствор кверцетина в 96% этаноле. 0,5 г кверцетина растворяют в 300 мл этилового спирта при слабом нагревании, охлаждают и доводят объем до 500 мл этиловым спиртом. Реактив хранят в темной склянке не более 1 недели.

0,5-процентный раствор лимонной кислоты. 0,5 г лимонной кислоты растворяют в 99,5 мл дистиллированной воды. Реактив хранят не более 1 месяца.

2.4.2. Приготовление хроматографической колонки с силикагелем

В стеклянную колонку размером 2 x 20 см, снабженную краном и пористым стеклянным фильтром, заливают на 1/2 высоты смесь гексан - уксусная кислота (20:3) и помещают 7 г силикагеля КСК (0,28 - 0,45 мм). Колонку перед употреблением промывают смесью гексан - уксусная кислота (20:3).

2.4.3. Приготовление хроматографических пластинок с тонким слоем сорбента

Из 40 г силикагеля КСК (0,10 - 0,14 мм), 1,5 г крахмала в 110 мл воды готовят сорбционную массу. Заваривают крахмал 15 мл воды, доливают остальную воду, засыпают силикагель и хорошо перемешивают. 10 г сорбционной массы наливают на пластинку и, покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Сушат в течение ночи при комнатной температуре. Хранят в эксикаторе.

2.5.1. Экстракция и очистка

Кровь. 5 мл крови экстрагируют трижды по 5 мл смесью гексан - уксусная кислота (20:3). Объединенные экстракты проводят через воронку с сульфатом натрия, удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C, растворяют сухой остаток в минимальном количестве смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и количественно наносят на хроматографическую пластинку.

Моча. 25 мл мочи экстрагируют дважды по 25 мл смесью гексан - уксусная кислота (20:3), затем к моче добавляют 5 мл этанола и опять экстрагируют 5 мл смеси гексан - уксусная кислота (20:3). Последнюю экстракцию повторяют еще раз, предварительно добавив 5 мл этанола. Объединенные экстракты проводят через воронку с сульфатом натрия и далее поступают, как и при анализе крови.

Кал. 5 г кала экстрагируют трижды по 5 мл смесью гексан - уксусная кислота (20:3). К объединенным экстрактам добавляют 0,5 г активированного угля, перемешивают раствор в течение 5 минут, отфильтровывают от частичек угля и проводят через колонку с силикагелем в колбу для выпаривания, туда же собирают и смывы (гексан - уксусная кислота 20:3) угля и колбы (2 x 10 мл), пропущенные через колонку. Удаляют растворитель на ротационном испарителе и далее поступают, как при анализе крови.

Печень, почки, мозг, легкие. 5 г пробы тщательно измельчают, помещают в коническую колбу на 100 мл, добавляют 15 мл смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и экстрагируют в течение 10 минут. Экстракцию повторяют еще дважды по 10 мл смеси. Собирают все экстракты в отдельную колбу, а к биоматериалу добавляют 5 мл разбавленной соляной кислоты (1:9), помешивают смесь 2 - 3 минуты и декантируют в колбу с первоначальными экстрактами. Процедуру повторяют еще раз. Объединенные экстракты проводят через колонку с силикагелем в колбу для выпаривания. Туда же собирают смывы колбы (2 x 10 мл), пропущенные через колонку. Выпаривают на ротационном испарителе растворители и далее поступают, как при анализе крови.

2.5.2. Хроматографирование и проявление

Удалив растворитель, сухой остаток растворяют в минимальном количестве смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и количественно наносят на хроматографическую пластинку, через 5 минут развивают хроматограмму в системе подвижных растворителей гексан:уксусная кислота (49:10,5). После окончания хроматографирования пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут на воздухе (под вытяжкой) для удаления следов растворителей. Хроматограммы проявляют одним из нижеследующих способов.

1. Опрыскивание 0,1% раствором гематоксилина в 95% этиловом спирте, УФ-облучение в течение 5 минут и опрыскивание 0,5-процентным водным раствором лимонной кислоты.

2. УФ-облучение в течение 10 минут и опрыскивание насыщенным этанольным раствором пирокатехолового фиолетового.

3. Опрыскивание 0,2 н раствором серной кислоты, УФ-облучение в течение 10 минут и опрыскивание 0,1-процентным этанольным раствором кверцетина.

Содержание гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты в пробе находят путем сравнения размеров и интенсивности окраски пятен с пятнами стандартных растворов.

Количество гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова и циклогексилоловянной кислоты рассчитывают по формулам:

в крови и моче:

где:

X - концентрация веществ в мкг/мл;

A - количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг;

V - объем взятой для анализа крови или мочи, мл;

в печени, почках, мозге, легких, кале:

где:

X - концентрация вещества, мкг/г;

A - количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг;

P - навеска биосубстрата, г.

При работе с пликтраном и его метаболитами беречь глаза, руки, а также соблюдать все требования безопасности, необходимые при работе с кислотами, ядовитыми и взрывоопасными веществами.